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蔓荆子提取物的有效成分研究及其含量测定

发布时间:08-29  
蔓荆子为常用中药材,中国药典收载蔓荆子商品为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex?trifolia?L.var.simplicifolia?Cham.或三叶蔓荆V.trifolia?L.的干燥成熟果实。单叶蔓荆分布广,产量大,在我国主要分布在山东、江西一带。蔓荆子作为中药,具有疏散风热、清利头目的功效[1]。目前,许多植物提取厂家都在生产蔓荆子提取物,但他们都是以牡荆素(Vitexin)为有效成分指标在生产,产品也是以牡荆素为指标在向客户销售,我们经过对蔓荆子提取物的研究发现,真正起主要作用的是蔓荆子黄素,根本就没有牡荆素的成分。我们对蔓荆子提取物进行了分离和测定,并从中分离出来了蔓荆子黄素,并对其进行含量测定,结果很好,对蔓荆子提取物的生产控制有可靠依据。
一、蔓荆子黄素的分离



1、仪器、试剂与提取物



1、1?仪器??X4型显微熔点测定仪,温度计未校正。HITACHI-200型紫外光谱仪。Shimadzu-400型红外光谱仪。FX-90Q?AM-300核磁共振仪,HP ???5989A色-质联用仪。



1、2??试剂??层析用硅胶为青岛海洋化工产品,Sephodex?LH-20凝胶树脂,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均为分析纯



1、3??提取物??蔓荆子提取物为自己生产产品



2、蔓荆子提取物的分离鉴定



Me?OH



max



?



取蔓荆子提取物1kg,用95%乙醇溶解,滤过,滤液回收乙醇并浓缩成稠膏,拌入硅胶,干燥后上硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,分别收集,根据薄层点板定性检查,取蔓荆子黄素部分,再上凝胶树脂,用氯仿-甲醇(1:1)洗脱,结晶分离,得两个化合物,一个为黄色细针状结晶,一个为黄色结晶。



?黄色结晶,mp189~190℃,盐酸-镁粉反应阳性,UVλ mn;256,273(sh),372;加三氯化铝-盐酸263,280(sh),371;加醋酸钠257,275,350(10min后不减弱);加醋酸钠-硼酸255,270,352。MSm/z;374(M+,100),359,355,331,316,301,285,273,257,245,217,187,173,164,151,135,135,121,93,69,53,43。1HNMRδppm:



3.73,3.80,3.87,3.92(s,OCH3×4),6.87(1H,s,8-H),7.1(1H,d,J=9.2H?z,5’-H),7.5(1H,dd,J=9.2,3.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=3.0Hz,2’-H),根据以上化学性质及光谱数据,鉴定为蔓荆子黄素。



黄色细针状结晶,mp242~243℃(含水甲醇重结晶,文献值236~238℃),盐酸-



MeOH



max



?



镁粉反应阳性,UVλ nm;260,273(sh),351;加甲醇钠270,404;加三氯化铝276,295(sh),405;加三氯化铝-盐酸268,280(sh),296(sh),372,400(sh);加醋酸钠265,402(10min后不减弱),加醋酸钠-硼酸264,376。MS?m/z;360(M+,100),345,341,319,302,299,274,259,245,231,217,203,181,166,153,137,121,109,97,81,69,55,43。1HNMRδppm:3.37,3.80,3.92(s,OCH3×3),6.68(1H,s,8-H),6.92(1H,d,J=8.5H?z,5’-H),7.49(1H,dd,J=8.5,2.0Hz,6’-H),7.6(1H,d,J=2.0Hz,2’-H),9.36,9.79,12.64(s)各一羟基上活泼氢,重水交换后消失。根据以上化学性质及光谱数据,鉴定为3,6,7-三甲基槲皮万寿菊素[2]?。?



二、蔓荆子黄素的含量测定



2、仪器与试剂



2、1仪器?美国热电TSP高效液相色谱仪,7725i自动进样器,AG135十万分子一电子天平



2、2?试剂?甲醇、磷酸均为分析纯,水为双重蒸馏水,对照品蔓荆子黄素自制,经HPLC分析,纯度为99.58%,蔓荆子提取物自己生产。



3、含量测定



3、1?色谱条件:色谱柱C18柱,流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40),检测波长258NM,流速1.0ml/min,柱温:30℃



3、2?标准曲线的制备:精密称取干燥至恒重的蔓荆子黄素对照品1.5mg,置于10ml容量瓶中,甲醇溶解定容,作为对照品溶液。精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,照上述条件测定,以蔓荆子黄素的峰面积积分值为纵坐标,其浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:C=2.225×10-7A-4.72×10-4,r=0.9999,其线性范围在0.015mg/ml—0.075mg/ml。



3、3?样品的测定:精密称取蔓荆子提取物25mg,置于50ml容量瓶中,加甲醇溶解,超声振荡,定容过滤,取续滤液,即为供试品溶液。照上述方法测定,计算含量即得。



3、4?回收率实验:精密称取已知含量的蔓荆子提取物25mg,加入蔓荆子黄素对照品0.75mg,按照样品测定项下进行处理,测定,计算回收率:98.18%,RSD=1.46%。



3、5?精密度试验:在上述条件下,对同一浓度的对照品溶液连续6次进样,计算峰面积平均值,RSD为0.945%。



3、6?重现性试验?按照样品测定方法,对同一批号样品进行5次平行试验,蔓荆子黄素含量RSD为1.72%。



?三、小结



从我们对蔓荆子提取物的分离鉴定部分说明,在蔓荆子提取物中根本就没有牡荆素成分,而只有与之功效几乎相同的蔓荆子黄素,同时,我们对蔓荆子提取物进行高效液相分析,也没有牡荆素的成分峰出现,所以现市场上走的蔓荆子提取物应以蔓荆子黄素为指标,在生产过程中也应以蔓荆子黄素为有效成分来控制蔓荆子提取物的生产,这为以后的蔓荆子生产提供了依据。



?四、参考文献



???[1]??吴永忠,朱良辉等,不同产地蔓荆子化学成分含量比较,中药材,23(10),2000,616~619



???[2]??王坤等,蔓荆子的薄层鉴定,山东中医杂志,18(2),1999,82~83


(责任编辑:walton)
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